本文作者：杜勇、陳宇、李浩渤 單位：河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院口腔內(nèi)科、河北省廊坊市人民醫(yī)院口腔科

口腔扁平苔蘚(orallichenplanus，OLP)是口腔黏膜一種常見的非感染性慢性炎癥，目前被認(rèn)為是細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病。國內(nèi)外研究相繼表明OLP具有癌變傾向，其癌前性質(zhì)引起廣泛關(guān)注［1］。Fascin蛋白是一種細(xì)胞骨架蛋白，F(xiàn)ascin蛋白的異常表達(dá)可引起腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)性顯著增強(qiáng)和細(xì)胞黏附能力的改變，使腫瘤細(xì)胞具有更強(qiáng)的侵襲性，進(jìn)入淋巴間隙，淋巴管和血管，增加轉(zhuǎn)移幾率。研究發(fā)現(xiàn)fascin蛋白在多種腫瘤組織和癌前病變組織中呈現(xiàn)陽性表達(dá)，其陽性表達(dá)的腫瘤組織學(xué)分級(jí)或者侵襲性往往較高［1－3］。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)Fascin蛋白在口腔白斑和口腔鱗狀細(xì)胞癌中呈現(xiàn)過高表達(dá)［4，5］。本研究通過免疫組化的試驗(yàn)方法檢測fascin蛋白在OLP中的表達(dá)，進(jìn)一步探討OLP癌變的發(fā)病機(jī)制，為OLP癌變的早期診斷和治療提供依據(jù)。

1資料與方法

1．1一般資料

收集河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院1995至2009年OLP蠟塊標(biāo)本52例(所有患者在取標(biāo)本前未經(jīng)任何治療)為試驗(yàn)組(OLP組)，每例標(biāo)本均進(jìn)行HE染色后經(jīng)有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師閱片后確診。其中男28例，女24例;年齡38～73歲，平均年齡52．6歲。正常口腔黏膜組織41例為對照組(NM組)，均取自囊腫旁及牙槽骨整形手術(shù)時(shí)切除的正常黏膜組織，每例均進(jìn)行HE染色后經(jīng)有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師閱片后確診。其中男22例，女19例;年齡21～68歲，平均年齡31．6歲。2組一般資料有均衡性。

1．2主要試劑與儀器

試劑:SP免疫組化試劑盒、一抗(購自博士德分裝抗體)、二氨基聯(lián)苯劑(DAB)顯色劑、多聚賴氨酸(Poly-L-lysine)防脫片劑均購于河北博海生物有限公司。儀器:顯微鏡(日本奧林巴斯BX51T-PHD-J11)、CMOS(日本奧林巴斯)、多功能真彩色細(xì)胞圖象分析管理系統(tǒng)(美國MediaCy-bernetics公司Image-ProPlus)、切片機(jī)(德國萊卡RM2015)、離心機(jī)(北京離心機(jī)廠LDZ5-2型)、電子天平(瑞士METTERAE100型)、移液器(德國EPPENDORF)、干燥箱(日本三洋MIR-153型)、低溫冰箱(日本三洋MDF-382E型)、恒溫水浴箱(江蘇太倉醫(yī)用儀器廠DSHZ-300型)、醫(yī)用微波爐(浙江臨安愛迪儀器廠YWY781B型)。

1．3對照試驗(yàn)

用已知的Fascin蛋白陽性的口腔鱗癌標(biāo)本作為陽性對照，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。

1．4試驗(yàn)方法

采用免疫組織化學(xué)SP法(過氧化物酶標(biāo)記的鏈酶卵白素法)。所有標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛固定，石蠟重新包埋后，將每個(gè)蠟塊切為5μm的切片，共切3張，1張HE染色，1張作為陰性對照，1張F(tuán)ascin蛋白染色。

1．5結(jié)果判定

Fascin蛋白染色判定參照Hashimoto的標(biāo)準(zhǔn)，以細(xì)胞膜和細(xì)胞漿顯示彌漫性棕黃色顆粒為陽性染色，每張切片隨機(jī)計(jì)數(shù)10個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞。據(jù)陽性細(xì)胞百分率判定:(1)未見棕黃色顆粒為陰性;(2)＜25%為弱陽性(+);(3)25%～75%為陽性(++);(4)＞75%為強(qiáng)陽性(+++)。1．6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS17．0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2．12組Fascin陰性率比較

黏膜標(biāo)本中均呈陰性表達(dá);NM組標(biāo)本呈現(xiàn)弱陽性表達(dá)(陽性細(xì)胞數(shù)＜25%)，細(xì)胞膜和細(xì)胞漿顯示彌漫性棕黃色顆粒，其余均呈現(xiàn)陰性表達(dá)，陽性率為9．62%，陽性率高于NM組(χ2=4．166，P＜0．05)。圖1、2。

2．2OLP組Fascin蛋白與性別、年齡的關(guān)系

在性別和年齡的對照中，fascin蛋白在口腔扁平苔蘚中的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0．05)。見表1。

3討論

Fascin蛋白在細(xì)胞的遷移、黏附等過程中發(fā)揮重要作用。Fascin蛋白能夠與F-肌動(dòng)蛋白結(jié)合成平行有序的束狀結(jié)構(gòu)，這種結(jié)構(gòu)能夠有效地加強(qiáng)肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架，抵抗細(xì)胞遷移時(shí)由細(xì)胞突起的運(yùn)動(dòng)引起的細(xì)胞膜延伸，從而對細(xì)胞移動(dòng)起著重要作用。Fascin蛋白的表達(dá)與腫瘤的分化增殖、細(xì)胞遷移及浸潤侵襲密切相關(guān)，為腫瘤早期診斷和預(yù)后的判定提供重要的依據(jù)。研究證實(shí)Fascin蛋白在正常黏膜中不表達(dá)或低表達(dá)，而在癌組織中高表達(dá)［1－3］。國內(nèi)試驗(yàn)證實(shí)口腔鱗狀細(xì)胞癌的Fascin蛋白表達(dá)顯著高于正常黏膜組織［4，5］。王德明［5］還發(fā)現(xiàn)在癌旁正常的口腔黏膜組織中也有Fascin蛋白的表達(dá)，12例口腔黏膜良性增生組織中2例出現(xiàn)Fascin蛋白表達(dá)。但未見報(bào)道在癌前病變OLP中Fascin蛋白的表達(dá)情況。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測了Fascin蛋白在41例正常口腔黏膜標(biāo)本和52例OLP標(biāo)本中的表達(dá)。NM組中Fascin蛋白均呈陰性表達(dá);OLP組中5例標(biāo)本呈現(xiàn)弱陽性表達(dá)(陽性細(xì)胞數(shù)＜25%、細(xì)胞膜和細(xì)胞漿顯示彌漫性棕黃色顆粒)，其余均呈現(xiàn)陰性表達(dá)，陽性率為9．62%，陽性表達(dá)率高于正常口腔黏膜(P＜0．05)，這與以往的研究［6］相近，正常食管黏膜中Fascin蛋白呈陰性表達(dá)或低表達(dá)，而在癌前病變食管黏膜的不典型性增生中Fascin蛋白呈現(xiàn)陽性表達(dá)，隨著食管癌的發(fā)展Fascin蛋白的陽性表達(dá)是逐漸增強(qiáng)的。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示OLP中Fascin蛋白的陽性率高于正常口腔黏膜，說明OLP存在潛在惡變的可能，F(xiàn)ascin蛋白可能在OLP惡變的過程中發(fā)揮一定的作用。但尚不能揭示Fascin蛋白與OLP惡變存在直接關(guān)系，F(xiàn)ascin蛋白在OLP惡變發(fā)生發(fā)展中的具體作用機(jī)制仍需要進(jìn)一步的研究。