柃屬包含約130種植物，是山茶科(Theaceae)厚皮香亞科(Ternstroemoideae)中最大1屬，分布于亞洲熱帶、亞熱帶及西南太平洋各島嶼［1-3］。我國(guó)共83種(63種中國(guó)特有)［3］。該屬植物是重要的蜜粉源［4］，也是極具開發(fā)潛力的園林植物［5-6］。但目前對(duì)本屬的研究還較少，多限于經(jīng)典分類及資源利用［6］。本屬植物具有穩(wěn)定的雌雄異株性系統(tǒng)［1，7-8］，目前只在少數(shù)物種中發(fā)現(xiàn)性別變異現(xiàn)象(性別表達(dá)偏離于正常的雌株及雄株)［9-12］，且僅在柃木(EuryajaponicaThunb．)中報(bào)道過兩性花［10-12］。野外調(diào)查發(fā)現(xiàn)，縉云山的一些鈍葉柃(EuryaobtusifoliaH．T．Chang)具有性別變異現(xiàn)象。研究發(fā)現(xiàn)，正常的雌花和雄花具有穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)，性別變異株上的花或是雄蕊數(shù)量減少，或是胚珠數(shù)量減少，或是雄蕊、雌蕊在形態(tài)上出現(xiàn)明顯的退化。正常雌花、雄花具有各自正常的性功能，個(gè)別性別變異株上的某些花具有兩性功能。開花、傳粉是有花植物完成有性生殖的必要條件，對(duì)于兩性器官分離的雌雄異株植物尤為重要。柃屬植物中除少數(shù)能進(jìn)行克隆生殖外［13］，多數(shù)僅具有性生殖。本文以北碚縉云山及西山坪的鈍葉柃作為研究對(duì)象，對(duì)其開花及傳粉特性進(jìn)行了初步研究，并對(duì)性別間存在的各方面差異進(jìn)行了比較分析，以期為深入研究該屬植物的生殖適應(yīng)機(jī)制及系統(tǒng)進(jìn)化提供一定參考。

1材料與方法

1．1研究地點(diǎn)

縉云山金果園3個(gè)樣地:JOd(JinguoOrchard-down，N29°51'41″，E106°23'34″，海拔341m)，JOm(JinguoOrchard-middle，N29°51'39″，E106°23'37″，海拔375m)，以及JOu(JinguoOrchard-up，N29°51'34″，E106°23'41″，海拔412m);西山坪一個(gè)樣地:XSP(Xishanping，N29°51'52″，E106°25'23″，海拔450m)。其中JOm及JOu具性別變異株及正常雌雄異株個(gè)體，JOm樣地雌株、雄株及性別變異株的比例為1∶1．5∶4．5，JOu中為1∶0.5∶1．25。JOd及XSP樣地中僅具正常雌雄異株個(gè)體，JOd樣地雌株與雄株的比例為1:1．2，XSP中為1∶1．11。

1．2物種

據(jù)各種植物志記載，鈍葉柃為雌雄異株［1，7-8］。雌株花僅具雌蕊，無退化雄蕊;雄株花具10枚左右雄蕊，中央具1形態(tài)穩(wěn)定的退化子房(半圓形突起)［9］。初步研究發(fā)現(xiàn)縉云山具正常雌雄異株個(gè)體(包括雌株、雄株)及性別變異株。雌株上僅具雌花;雄株上僅具雄花;性別變異株在性別表達(dá)上偏離于正常雌株及雄株:有的具有兩性功能(具有兩性花或同時(shí)具有雌花及雄花);有的僅具雌性功能，但具不同程度退化的雄蕊;有的僅具雄性功能，但不育雌蕊發(fā)育明顯。若無特殊說明，本文所提雌花及雄花分別指正常雌株及雄株上的花。

1．3花部形態(tài)及開花動(dòng)態(tài)

對(duì)野外植株掛牌標(biāo)記。取新鮮花枝于冰盒中保鮮，帶回室內(nèi)置于NikonSM21000體視鏡下觀察、拍照及測(cè)量。共獲得6雌株(JOd、XSP各3株)，4雄株(JOd、XSP各2株)及12性別變異株(JOm及JOu)上224朵花(完全開放，每株9—15朵)的13項(xiàng)形態(tài)數(shù)據(jù)。花粉及柱頭形態(tài)于PhenixPH100光學(xué)顯微鏡下觀察。2011年2月10日至3月20日，每日對(duì)金果園3個(gè)樣方中10株(3雌株，5雄株，2性別變異株)上338朵花(雌株136，雄株154，性別變異株48)觀測(cè)、記錄、拍照。并注意觀察花形態(tài)、泌蜜及花的色味變化，花藥及柱頭的形態(tài)變化。以花瓣展開出現(xiàn)開口為開花標(biāo)志，花瓣變黃或脫落為開花結(jié)束標(biāo)志。共記錄了254朵花(雌株97、雄株137、性別變異株20)從開始開花至開花結(jié)束的完整變化。注意記錄每日天氣狀況、溫度及濕度。

1．4花朵朝向

每株上隨機(jī)選取不同方位花共30朵，用量角器測(cè)量其中軸與鉛垂線近地一側(cè)的夾角。角度等于0°者為垂直朝下，大于90°者為朝上，0°至90°間者為斜向下。共隨機(jī)測(cè)量了5雌株，6雄株及4性別變異株。

1．5花粉活力及柱頭可授性

用1%MTT水溶液檢測(cè)花粉活力。被染成藍(lán)色者為具活力花粉，不被染色者為不具活力花粉。花粉活力為被染色花粉的百分比。柱頭可授性測(cè)定方法與花粉測(cè)定方法類似，具可授性的部分被染成藍(lán)色［14-15］。

1．6花粉對(duì)水的耐受性檢測(cè)

參考Mao等［16］檢測(cè)花粉對(duì)水耐受性的方法。9:00之前取當(dāng)天開放花的新鮮花粉，分別于蒸餾水，無蔗糖花粉培養(yǎng)液，10%蔗糖花粉培養(yǎng)液及50%蔗糖花粉培養(yǎng)液中，于即時(shí)溫度(10℃左右)下培養(yǎng)，每組3個(gè)重復(fù)。每隔一段時(shí)間，取出3滴于載玻片上，用1%MTT染色10min，于顯微鏡下分別觀察并計(jì)算染色率及萌發(fā)率。

1．7花粉量測(cè)定

取將開放花，投入裝有1mL蒸餾水的1．5mL離心管中，用鑷子將花朵于液體中碾碎。置離心管于超聲波清洗儀中處理30min，使花粉從花藥中分離并均勻分散于液體中。處理完成后，每管取10μL于載玻片上記錄花粉數(shù)量，重復(fù)5次，計(jì)算單花花粉量。

1．8花蜜體積的測(cè)定

采用濾紙條法［17］。于測(cè)量前一天吸干花蜜并對(duì)花枝套袋［15］，1d后用1mm寬濾紙條測(cè)量花蜜沾濕長(zhǎng)度。以20%蔗糖溶液制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算單花單日泌蜜量。

1．9套袋及套網(wǎng)實(shí)驗(yàn)

于開花前對(duì)雌株及兩性株分別進(jìn)行3組處理［18］:1)套硫酸紙袋，2)套80目尼龍網(wǎng)袋，3)僅標(biāo)記不套袋。分別檢測(cè)鈍葉柃的無融合生殖情況，風(fēng)媒傳粉情況及自然結(jié)實(shí)率。于5月中旬果實(shí)發(fā)育但未成熟時(shí)統(tǒng)計(jì)結(jié)實(shí)率。由于鈍葉柃花小且多，本試驗(yàn)對(duì)其枝條進(jìn)行整枝套袋、套網(wǎng)［18］。

1．10傳粉昆蟲及傳粉行為

于盛花期連續(xù)數(shù)日觀察訪花者類別及訪花頻率［15］。采集訪花者制成標(biāo)本以備鑒定。攝像記錄訪花者的訪花行為及訪花時(shí)間［19］。注意記錄各時(shí)段溫度、濕度及天氣變化。